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                    首页>产品中心>>细胞株>荧光定量 PCR检测服务

                    荧光定量 PCR检测服务

                    产?#26041;?#32461;

                     荧光定量 PCR检测服务
                    一、 miRNA qPCR 技术服务项目
                       1. 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针
                       2. 抽提DNA/RNA,逆转录RT-PCR及cDNA扩增
                       3. eal-TimePCR(荧光定量PCR),进行实验结果分析  
                       4.特色项目
                         a、特殊物种(除人、大鼠及小鼠外)miRNA特异性引物设计(SYBR Green染料法)。本公司设计提供特异性的茎环引物,相较于传统的Olig-dT引物,结果准确率更高。
                         b、miRNA 差异性表达数据分析(包括提供t-test结果、实验步骤、扩增曲线图、溶解曲线图、差异表达分析?#25216;?#21407;始数据)。
                     荧光定量 PCR检测服务
                    二、 miRNA qPCR 技术服务流程
                       1. 样品RNA准备
                       提供样品总RNA,也可提供组织、血液、细胞类样品,需支付样品的前期处理费用。
                       2. RNA质量检测
                       紫外吸收测定法测定波长260nm和280nm的吸收值,判断RNA样品的浓度。
                       3. 逆转录合成cDNA
                       利用茎凸环引物逆转录合成cDNA链。
                       4. 实时荧光定量PCR
                       以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增(每个样品检测三次,同时检测每个样品中U6 snRNA或5S rRNA含量作为内参,以校正上样误差)。
                       5. 分析结果、提供实验报告
                       相对定量—分析相对表达参数,提供统计学分析,获得相对表达差异;
                    定量—依据miRNA标准品制作标准曲线(每条曲线上至少设置5个数据点),以定量样品中的待检测miRNA;
                    分析实时定量PCR结果,提供实时定量PCR实验数据和扩增曲线,融解曲线,柱状图。

                     
                    三、miRNA qPCR技术服务样品提供
                       a. RNA样品:取10µg总RNA,并提供RNA质量检测图。要求浓度在500ng/µl以上,体积在20µl以上,OD260/OD280的比值在1.8至2.0之间,电泳检测28s的亮度约为18s的两倍。-80℃贮存,干冰运输。
                       b. 组织样品:请将200mg以上的组织样本,并分装为两管。-80℃或者液氮贮存,干冰运输。
                       c. 血液样品:请提供至少2mL血样,并在2小时内处理完毕后加入Trizol。
                         全血:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,按每200µl全血加入1ml Trizol的比率加?#33009;?#37327;Trizol,?#34892;?#25671;匀,放入干冰或者-80℃箱保存,干冰运输。
                         血浆:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,4℃ 4000rpm离心5分钟,上层为血浆样本,按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加?#33009;?#37327;Trizol,?#34892;?#25671;匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。
                         血清:用非抗凝管收集血样,静置分离上层血清,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加?#33009;?#37327;Trizol,?#34892;?#25671;匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。
                      d. 细胞样品:
                        贴壁细胞
                       (1) 贴壁细胞培养或处理结束后,去除培养?#28023;?br />   (2) 按每10 cm2 培养面积加1 mL Trizol?#32422;?#30340;比例加入Trizol?#32422;粒?#25671;匀,细胞接触到Trizol而被充分消化;
                       (3) 用1 ml枪头反复吹打, 并将Trizol细胞悬液转移至RNAase-free 的EP管中;
                       (4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。
                       悬浮细胞
                       (1) 悬浮细胞培养或处理结束后,离心去除培养?#28023;?br />   (2) 保留的细胞用PBS 缓冲液快速洗一次,离心除去PBS 缓冲?#28023;?br />   (3) 按照每5×106 个细胞加1 mL Trizol的比例加入Trizol?#32422;粒行?#25391;荡使细胞充?#20013;?#28014;;
                       (4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。

                     

                     

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